IPSC實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2025-10-29
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包被液有哪些？
Vitronectin
玻連蛋白是血清和組織中的關(guān)鍵細(xì)胞粘附因子，通過與糖胺聚糖和蛋白聚糖結(jié)合，在細(xì)胞相互作用中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。它被特定的整合素識(shí)別并作為重要的粘附分子，促進(jìn)細(xì)胞-基質(zhì)相互作用。
Matrigel
是一種從小鼠肉瘤中提取的、可溶的基底膜基質(zhì)。在室溫或體溫下，它能從液態(tài)凝固成凝膠狀，為細(xì)胞生長(zhǎng)提供一個(gè)模擬體內(nèi)真實(shí)環(huán)境的三維支架。
要準(zhǔn)備的試劑
iPSC培養(yǎng)基
ROCK抑制劑
EDTA溶液
DPBS
IPSC復(fù)蘇
預(yù)熱平板：提前1h取出包被好的平板，室溫平衡
快速化凍：取出細(xì)胞凍存管置于37℃水浴鍋搖晃化凍
離心重懸：將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含培養(yǎng)基的離心管中
ROCKi是救星：離心棄上清，用含ROCKi的iPSC完培重懸細(xì)胞
均勻接種：棄掉包被液，接種細(xì)胞，十字搖晃平板混勻細(xì)胞
IPSC傳代
第一次換液：復(fù)蘇后24h將孔內(nèi)培養(yǎng)液更換為不含ROCKi的完培
看準(zhǔn)時(shí)機(jī)：此后每天換液，直至細(xì)胞匯合度長(zhǎng)至80-90%可進(jìn)行傳代
預(yù)熱平板：提前1h取出包被好的平板，室溫平衡
消化要輕柔：將傳代細(xì)胞的孔內(nèi)培養(yǎng)液棄掉，加入DPBS輕柔潤(rùn)洗一遍后棄掉，加入EDTA溶液，放回培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化，消化結(jié)束后棄掉EDTA，加入完培終止消化
均勻接種：取一定量細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞接種
